استفاده از روش real-time pcr روی نمونه‏های آمنیوسیت برای تشخیص پیش از تولد نشانگان داون

هدف: این مطالعه به‏منظور بررسی امکان تشخیص نشانگان داون پیش از تولد با روش real-time pcr انجام شد. در این راستا، تعیین روش مناسب برای تخلیص dna از نمونه‏های آمنیوسیت برای دستیابی به dna با کیفیت بالا نیز مورد توجه قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ابتدا زنان بارداری که در غربالگری از طریق سنجش نشانگرهای بیوشیمیایی و سونوگرافی خطر بالای ابتلای جنین به نشانگان داون را داشتند، به مرکز ﺁمنیوسنتز معرفی شده و از مایع آمنیوتیک آن‏ها نمونه‏گیری شد. تخلیص dna از 59 نمونه مایع آمنیوتیک با روش‏های مختلف انجام شد که این روش‏ها شامل روش جوشاندن، روش رسوب‏دهی با نمک، دستورالعمل استخراج dna از خون و بافت با کیت dnptm (سیناژن)، دستورالعمل استخراج dna از سلول با کیت dna isolation kit for cells and tissues (roche)، دستورالعمل استخراج dna از بافت با کیت magna pure dna isolation (roche) و کیت qiaamp dna micro (qiagen) بودند. سپس کیفیت و کمیت نمونه‏های تخلیص شده به‏وسیله دستگاه اسپکتروفتومتر نانودراپ nanodrop® nd-1000 ارزیابی شد. واکنش real-time pcr با استفاده از رنگ سایبرگرین i (applied biosystems, uk) به‏منظور تکثیر اختصاصی ژن‏های dyrk1a2 و dscam و ژن مرجع pmp22 روی نمونه‏های تخلیص شده انجام شد. آنالیز داده‏ها با استفاده از روش مقایسه‏ای چرخه آستانه برای تعیین میزان ژنی و تعیین تعداد نسخه‏های کروموزوم 21 صورت گرفت. نتایج: این بررسی نشان داد که dna استخراج شده از نمونه‏های مایع آمنیوتیک با استفاده از کیت qiaamp dna micro دارای کمیت و کیفیت مطلوب است. تکثیر اختصاصی ژن‏های هدف و مرجع انجام و تفاوت گروه طبیعی و گروه مبتلا براساس اختلاف در چرخه آستانه مشخص شد. نتیجه گیری: تشخیص پیش از تولد با روش real-time pcr روی نمونه‏های dna تخلیص شده از سلول‏های مایع آمنیوتیک با استفاده از کیت qiagen امکان‏پذیر است. نتایج حاصل با نتایج مشابه حاصل از روش‏های متداول سیتوژنتیک قابل مقایسه است.